Для подтверждения результатов определения группы крови по системе AB0 в ряде случаев применяется перекрёстный метод (двойное типирование). Он считается одним из наиболее надёжных способов исследования, поскольку основан на одновременном определении антигенов на поверхности эритроцитов и естественных антител в сыворотке исследуемой крови. Такой подход позволяет существенно повысить достоверность результатов и своевременно выявить возможные расхождения.
Перекрестный метод определения группы крови https://sangvitest.ru/perekrestnyj-metod-opredeleniya-gruppy-krovi/ широко применяется в иммуногематологических лабораториях при обследовании доноров крови, реципиентов перед плановыми трансфузиями, а также в случаях получения неоднозначных или сомнительных результатов первичного исследования. Метод позволяет надёжно определить принадлежность крови к одной из четырёх групп системы AB0, а при выявлении несоответствий служит основанием для проведения дополнительных иммуногематологических исследований.
Принцип метода заключается в выполнении двух независимых реакций. В первой определяется наличие антигенов A и B на поверхности эритроцитов с использованием моноклональных реагентов (цоликлонов) либо стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Во второй исследуются естественные антитела сыворотки пациента с помощью стандартных эритроцитов известных групп крови. Полученные результаты должны взаимно подтверждать друг друга.
Для выполнения исследования используются:
- цоликлоны либо стандартные изогемагглютинирующие сыворотки;
- стандартные эритроциты известных групп крови;
- планшет или специальная диагностическая пластина;
- пипетки или дозаторы;
- одноразовые палочки или аппликаторы для перемешивания реагентов;
- средства контроля времени и достаточного освещения рабочего места.
Перекрестный метод определения группы крови выполняют в следующей последовательности:
- На диагностическом планшете обозначают позиции для проведения реакций с реагентами и стандартными эритроцитами, после чего наносят идентификационный номер исследуемого образца.
- Из образца крови получают эритроцитарную взвесь и сыворотку (или плазму) в соответствии с принятой лабораторной методикой.
- На одну группу лунок наносят реагенты для определения антигенов AB0, а на другую — стандартные эритроциты известных групп крови.
- К реагентам добавляют исследуемые эритроциты, а к стандартным эритроцитам — сыворотку исследуемой крови.
- Каждую реакционную смесь перемешивают отдельным одноразовым аппликатором, после чего планшет осторожно покачивают и выдерживают установленное инструкцией время.
Оценка результатов основана на наличии или отсутствии реакции агглютинации.
- Если агглютинация наблюдается с реагентами Анти-A, Анти-B и Анти-AB, а сыворотка не реагирует ни с одними стандартными эритроцитами, исследуемая кровь относится к группе AB(IV).
- Если эритроциты агглютинируют с реагентами Анти-B и Анти-AB, а сыворотка реагирует со стандартными эритроцитами группы A, определяется группа B(III).
- Если агглютинация наблюдается с реагентами Анти-A и Анти-AB, а сыворотка взаимодействует со стандартными эритроцитами группы B, устанавливается группа A(II).
- При отсутствии агглютинации с реагентами Анти-A, Анти-B и Анти-AB и наличии реакции сыворотки со стандартными эритроцитами групп A и B кровь относится к группе O(I).
Если результаты прямого и обратного типирования не совпадают либо выявляются необычные реакции агглютинации, исследование считается незавершённым. В подобных случаях выполняются дополнительные иммуногематологические тесты для уточнения групповой принадлежности крови и исключения редких вариантов системы AB0, приобретённых изменений антигенов, наличия холодовых антител и других причин расхождения результатов.
Все образцы крови рассматриваются как потенциально инфекционно опасный биологический материал. Поэтому исследование проводится с обязательным соблюдением требований биологической безопасности, использованием средств индивидуальной защиты и выполнением действующих правил обращения с биологическими материалами. Это обеспечивает безопасность лабораторного персонала и достоверность получаемых результатов.